ELISA法手工測定的影響因素

ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點(diǎn)，因而多年來廣泛應(yīng)用于血站和醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室中，但在測定中常會出現(xiàn)一些誤差和問題。我們通過幾年的實(shí)驗(yàn)觀察，認(rèn)為影響結(jié)果的因素有如下方面。

1  試劑盒

        （1）抗原、抗體活性對效價(jià)的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價(jià)降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實(shí)驗(yàn)中空白對照OD值偏高或假陽性。

       （2）酶結(jié)合物濃度過高，也會導(dǎo)致OD值假性增高。

2  試驗(yàn)儀器

      （1）加樣器是否經(jīng)過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不精QUE，會使結(jié)果忽高忽低。

      （2）每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無堵塞。

3  操作

    （1）檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏，以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低。

    （2）加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    （3）洗滌不充分，會使結(jié)果假性增高，過分洗滌呈假陰性。

    （4）比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí)，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高。

    （5）抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到*平衡，依賴于溫度與時(shí)間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度。總之，由于ELISA實(shí)驗(yàn)的影響因素較多，在實(shí)際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì)，避免和排除各種因素的影響，使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。