茁彩生物｜檸檬酸（CA）檢測

檸檬酸（Citric Acid, CA），又稱枸櫞酸，是一種重要的有機(jī)酸，在自然界中分布很廣，天然的檸檬酸存在于植物如檸檬、柑橘、菠蘿等果實(shí)和動物的骨骼、肌肉、血液中。很多種水果和蔬菜，尤其是柑橘屬的水果中都含有較多的檸檬酸，特別是檸檬和青檸含有大量檸檬酸。

目前，可采用分光光度法檢測檸檬酸（CA）的含量。

分光光度法是基于物質(zhì)對光的吸收特性進(jìn)行的。當(dāng)光線穿過物質(zhì)時，會被物質(zhì)吸收，且吸收程度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，通過測量光線通過物質(zhì)時的吸光度，可以確定物質(zhì)的濃度。在 CA 含量檢測中，常用的分光光度法包括比色法、吸光光度法等。

一、樣品中檸檬酸提取：

a. 液體樣品中檸檬酸提取：取 0.1mL 液體加試劑一 0.9mL，充分混勻，11000g/min 4℃離心 10min， 取上清液，待測。

b. 組織中檸檬酸提取：稱約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一，冰上充分研磨，11000g/min 4℃離心 10min，取上清液，待測。

c. 線粒體中檸檬酸提取：稱約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一，冰上充分研磨，600g/min，4℃離心5min；取上清至另一 EP 管中，11000g/min，4℃離心 10min，棄上清（此上清液可用于細(xì)胞質(zhì)CA 含量測定）；向沉淀中加試劑二 200µL，以及試劑三 2µL，充分懸浮溶解，11000g/min，4℃離心 10min，取上清液，待測。

二、測定：

1. 分光光度計預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 545 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一置于 30℃水浴中預(yù)熱 30min 以上。

3. 按下圖在 1.5mLEP 管中加入相應(yīng)試劑