如何通過酶聯(lián)免疫吸附測定水產品中的組胺殘留

組胺（Histamine）是一種分子量只有 111 u 的小分子堿。組胺廣泛存在于各種有機體中，低濃度時對于維持機體正常生理功能具有重要作用。然而，在食品發(fā)酵或者食物腐敗變質后，組胺含量明顯升高,在一些發(fā)酵食品和水產品中通常含有較高含量的組胺，食品中的組胺被人體過量攝入后會引起中毒現(xiàn)象。有報道稱當人體攝入 40 mg 以下組胺時就會產生輕微中毒癥狀，超過 40 mg 攝入即可產生中等中毒癥狀，大于 100 mg 攝入則產生嚴重中毒癥狀。攝入高濃度的組胺食品，會引起人眼結膜充血、頭昏胸悶等中毒癥狀，嚴重者甚至會致人死亡。由于攝入大量組胺引起的食物中毒時間時常發(fā)生，因此，許多國家和組織對食品中的組胺制定 了嚴苛的標準。

目前水產品中組胺的檢測方法主要有比色法、薄層色譜法、生物傳感器法、毛細管電泳法和高效液相色譜法等。但大部分方法都比較繁瑣、費時、費力且成本高，而且檢測靈敏度和檢測范圍有待提高。由于酶聯(lián)免疫吸附測定方法有操作簡便、靈敏度高、成 本低、便于大規(guī)模篩選等優(yōu)點，目前已成為檢測食品中化學污染物的重要工具之一。國內有關食品中組胺的 ELISA 法較少，為了結合我國食品安全檢測的國情，更多的進行現(xiàn)場初篩再配合大型儀器進一步確認，探究方便高效的針對組胺殘留的免疫檢測方法，對于提高實際樣品檢測效率具有重要意義。對于 ELISA 法檢測組胺而言，由于組胺分子量低，分子特征不顯著，組胺抗體制備極為關鍵，直接與蛋白偶聯(lián)制備作為免疫抗原難以制備出特異性識別組胺的抗體，即使制備出來，由于其特異性和靈敏度太低，檢測限一般只能達到 mg/kg 級別，實際應用受限。因此通常的做法是將組胺衍生，制備特異性識別組胺苯醌衍生物的抗體，從而建立基于衍生間接檢測組胺的 ELISA 方法。本研究旨在通過制備針對組胺殘留檢測的有效抗體，建立一種與現(xiàn)有檢測方法相比更為靈敏、快速和可靠的免疫檢測分析法,并應用在實際樣品中組胺殘留的快速檢測，從而為水產品中組胺殘留檢測產品的開發(fā)提供技術支持。

組胺檢測標準曲線繪制

將包被濃度、抗體稀釋倍數(shù)、酶標二抗稀釋倍數(shù)以及競爭藥物濃度等優(yōu)化到最佳狀態(tài)，根據最佳優(yōu)化條件進行間接競爭 ELISA 測定，以組胺標準品濃度 （μg/L）的半對數(shù)值為 X 軸，以 A450nm吸光度比值為Y 軸，繪制標準曲線圖。